1. 雄性C57BL/6小鼠,10周龄。
2. 小鼠适应性饲养一周后,行左颈总动脉和右肾动脉结扎术。
3. 常规麻醉消毒后,分离左侧颈总动脉进行结扎,然后缝合颈部皮肤。
4. 腹部右侧消毒后,分离右肾动脉进行结扎,然后关腹;待小鼠苏醒后放回饲养笼继续饲养。
7. 一周后,麻醉小鼠,固定在立体定位仪上,暴露颅骨,确认Bregma点。
8. 在Bregma点前1.2mm、右侧0.7mm的位点转孔,颅平面下深度4.7mm的位置注射弹性蛋白酶到大脑基底池。
9. 弹性蛋白酶以0.5μl/min的速度,注射2.5μl(35mU),停针10min。
10. 弹性蛋白酶注射后,缝合小鼠皮肤。
11. 将预先充好血管紧张素的微渗透泵埋置在小鼠背部皮下。
12. 微渗透泵速度1000ng/kg/min 。
13. 每日监测小鼠的神经症状,如小鼠出现不活动、瘫痪、体重≥15%的降低,立即终止实验,检查大脑颅底Willis血管环。
14. 实验的第21天,所有小鼠心脏灌注3ml 4%的多聚甲醛,随后溴酚蓝明胶溶液心脏灌注,体视镜下检查大脑颅底Willis血管环附近颅动脉瘤形成及破裂情况。
15. 小鼠颅底拍照示颅内动脉瘤形成情况。