细胞免疫荧光的具体实验步骤介绍

　　细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导，细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合，原理就是利用抗原-抗体反应之后，采用荧光标记，标记完成后，显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少，从而做出一个定位研究，也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导，细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速度快的特点，是目前比较常用的组织学技术，也是比较精确的。
　　细胞免疫荧光实验步骤：
　　首日：
　　1.在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；
　　2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min，PBS浸洗玻片3次，每次3min；
　　3.0.5%TritonX-100(PBS配制)室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；
　　4.PBS浸洗玻片3次，每次3min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；
　　5.吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；
　　次日：
　　6.加荧光二抗：PBST浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
　　7.复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST5minx4次洗去多余的DAPI；8.用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。