胎鼠皮层神经元的原代培养

一、背景
大脑皮层是调节躯体运动的最高级中枢。它由初级感觉区、初级运动区和联合区三部分构成。人类大脑皮层的神经细胞约有140亿个，面积约2200平方厘米，主要含有锥体形细胞、梭形细胞和星形细胞（颗粒细胞）及神经纤维。

体外原代培养神经元作为神经科学研究的有力手段，越来越受到广大科研工作者的重视。由于神经元是一种高度分化的细胞，动物出生后很少分裂，相对于其它细胞而言，神经元在体外更难以存活和生长。因此，体外培养神经元要求的培养方法和营养条件均较为特殊。

二、实验步骤
1. 无菌条件下，从怀孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入预冷的无钙、镁平衡盐溶液中；
2.在解剖显微镜下，分离取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织（1mm3），加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱内消化10 分钟，期间摇晃一次；
3.去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清；剩余沉淀加入终止液继续吹打5-10次;
4.所收集的上清过滤后，将细胞悬液于4℃1000rpm离心10min ，弃上清，管内加入新鲜培养液重悬；
5.台盼蓝染色计数，以 3 x 104cells/孔种入包被的24孔板，37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养；
6.每周换液两次，每次半量换液。